Natasya Okta Venessa Naue, 2023. Isolasi, Karakterisasi dan Uji Aktivitas Bakteri Endofit Tanaman Insulin (Smallanthus sonchifolius) sebagai Anti Hiperglikemia Pada Mencit Jantan (Mus musculus), Skripsi, Program Studi S1, Jurusan Farmasi, Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo. Pembimbing I Mahdalena Sy. Pakaya, S.Farm., M.Si., Apt dan Pembimbing II Endah Nurrohwinta Djuarno, M.Sc., Apt. Bakteri endofit adalah mikroorganisme yang hidup di dalam jaringan tanaman selama periode tertentu dari siklus hidupnya. Bakteri endofit dapat membentuk koloni dalam jaringan tanaman tanpa membahayakan inangnya. Hubungan simbiosis mutualisme antara bakteri dan tumbuhan memungkinkan bakteri endofit berpotensi dapat dimanfaatkan sebagai penghasil metabolit sekunder seperti yang terkandung di dalam tanaman inangnya. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan karakterisasi bakteri endofit yang terdapat pada tanaman insulin (Smallanthus sonchifolius), serta menguji aktivitas antihiperglikemia pada mencit jantan. Metode yang digunakan pada tahap isolasi adalah metode tanam langsung sehingga dapat terlihat jelas bakteri endofit yang keluar dari jaringan tumbuhan; tahap karakterisasi secara makroskopik dan mikroskopik; tahap uji antihiperglikemia pada mencit dilakukan dengan mengukur penurunan gula darah persatuan waktu. Jumlah bakteri yang berhasil diisolasi sebanyak 1 isolat; BTI (isolat bakteri tanaman insulin). Berdasarkan hasil karakterisasi secara makroskopik dan mikroskopis, bakteri tersebut menunjukkan karakteristik yang berbeda. Uji aktivitas antihiperglikemia hewan uji yang digunakan sebanyak 15 ekor mencit dibagi dalam 5 kelompok. Kelompok I (kontrol negatif : Na-CMC), Kelompok II (kontrol positif : glimepirid), Kelompok III (Cellfree supernatant pada inkubasi hari ke-3), Kelompok IV (Cellfree supernatant pada inkubasi hari ke-5), dan Kelompok V (Cellfree supernatant pada inkubasi hari ke-7). Hasil yang didapatkan bahwa semua kelompok uji yang menggunakan cellfree supernatant dari bakteri endofit tanaman insulin berkhasiat sebagai antihiperglikemia pada mencit. Kata Kunci : Bakteri Endofit, Isolat Bakteri, Isolasi, Karakterisasi, Antihiperglikemia, Smallanthus sonchifolius. Natasya Okta Venessa Naue, 2023. Isolation, Characterization, and Activity Test of Insulin (Smallanthus sonchifolius) Endophytic Bacteria as Anti-Hyperglycemia in Male Mice (Mus musculus), Undergraduate Thesis, Bachelor's Degree Program, Department of Pharmacy, Faculty of Sports and Health, Universitas Negeri Gorontalo. The Principal Supervisor is Mahdalena Sy. Pakaya, S.Farm., M.Si., Apt and the Co-supervisor is Endah Nurrohwinta Djuarno, M.Sc., Apt. Endophytic bacteria are microorganisms that live in plant tissue during certain periods of their life cycle. These bacteria can form colonies in plant tissue without harming the host. The mutualistic symbiotic relationship between bacteria and plants allows endophytic bacteria to potentially be used as producers of secondary metabolites such as those contained in their host plants. This present research aimed to isolate and characterize endophytic bacteria found in insulin (Smallanthus sonchifolius), as well as testing anti-hyperglycemia activity in male mice. The method used in the isolation stage was the direct planting method so that endophytic bacteria could be clearly observed coming out of the plant tissue, and the macroscopic and microscopic characterization stage. In the meantime, the anti- hyperglycemia test stage in mice was carried out by measuring the decrease in blood sugar per unit of time. The number of isolated bacteria was 1 isolate, BTI (insulin plant bacterial isolate). In accordance with the results of macroscopic and microscopic characterization, the two microbes indicated different characteristics. The anti-hyperglycemia activity test of the test animal involved was 15 mice divided into five groups. Group I (negative control: Na-CMC), Group II (positive control: glimepiride), Group III (Cell-free supernatant on day 3 of incubation), Group IV (Cell-free supernatant on day 5 of incubation), and Group V (Cell-free supernatant on day 7 of incubation). The results obtained showed that all test groups used cell-free supernatant from endophytic bacteria of insulin plants which were efficacious as anti- hyperglycemia in mice. Keywords: Endophytic Bacteria, Bacterial Isolate, Isolation, Characterization, Anti-hyperglycemia, Smallanthus sonchifolius.