Enzim selulase merupakan enzim yang mampu mendegradasi selulosa dengan produk utamanya yakni glukosa, selobiosa dan xilooligosakarida, selulase memiliki sistem enzim yang tersusun dari endo-1,4-β-glukanase, ekso-1,4-β-glukanase dan β-D-glukosidase. Penelitian ini bertujuan untuk memproduksi, melakukan pemurnian serta menguji aktivitas enzim selulase dari Aspergillus niger dengan menggunakan Carboxymethyl Cellulose (CMC) sebagai penginduksi. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental yang dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Farmasi dan Laboratorium Analisis Farmasi dengan metode yang digunakan fermentasi cair untuk produksi enzim, pemurnian enzim dilakukan dengan fraksinasi menggunakan presentasi kejenuhan ammonium sulfat dan uji aktivitas enzim selulase dilakukan dengan metode asam 3,5-dinitrosalisilat (DNS) dan dianalisis dengan Spektrofotemtri UV-VIS pada panjang gelombang 540 nm. Hasil produksi enzim selulase lebih banyak dengan menggunakan CMC dibandingkan tanpa penambahan CMC. Hasil pemurnian enzim selulase menghasilkan beberapa fraksi yaitu 0-20%, 20-40%, 40-60%, 60-80%, dan 80-100%. Hasil uji kualitatif menunjukan positif enzim selulase yang ditandai dengan terbentuknya zona hidrolitik. Serta pada hasil uji aktivitas secara kuantitatif menunjukan aktivitas enzim selulase tertinggi berada pada fraksi 40-60% yaitu pada enzim dengan penambahan CMC dan tanpa penambahan CMC berturut-turut sebesar 0,164 U/mL dan 0,154 U/mL Kata Kunci : Pemurnian, Enzim selulase, Aspergillus niger, CMC