Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui diversitas Actinomycetes yang terdapat pada rhizosfer tanaman jagung (Zea mays L.) di Desa Mohiyolo, Kecamatan Asparaga, Kabupaten Gorontalo. Pengambilan sampel dilakukan secara purposive sampling pada tiga titik lokasi berbeda, kemudian dilakukan isolasi, purifikasi, dan identifikasi Actinomycetes berdasarkan karakter morfologi, fisiologi, dan molekuler. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 4 isolat Actinomycetes berhasil di identifikasi dari dua lokasi, sedangkan satu lokasi lainnya hanya ditemukan 3 isolat non-Actinomycetes. Analisis fisiologis berdasarkan kemampuan menghasilkan pigmen menunjukkan adanya dua kelompok utama Actinomycetes. Analisis molekuler menggunakan sekuens gen 16S rRNA menunjukkan bahwa isolat RFZm-Pg berkerabat dekat dengan genus Streptomyces, sedangkan isolat RFZm-Pw berkerabat dekat dengan genus Nocardiopsis. Penelitian ini mengungkapkan bahwa rhizosfer jagung di Gorontalo memiliki keragaman Actinomycetes yang berpotensi sebagai agen hayati dalam mendukung pertumbuhan tanaman di sektor pertanian maupun perkebunan. Kata kunci: Actinomycetes, rhizosfer, jagung, diversitas,Streptomyces, Nocardiopsis